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Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(兔IgG)图片
产品货号:
ZN1933
中文名称:
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(兔IgG)
英文名称:
DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting
产品规格:
1盒
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
工作原理:聚合标记法是一种酶标记方法,其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测,更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗,更重要的是使条带更清晰,甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一,反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物,适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方,具有操作简单,储存稳定,信号灵敏度高,持续时间长,背景低,结果易保存等优点。
保存条件:-20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期:一年。
试剂盒的内容:
(1)封闭试剂:10 g 蛋白干粉×2 包。
(2)浓缩抗体稀释液:20 ml×1 瓶,为10倍浓缩液。
(3)聚合过氧化物酶标记山羊抗兔IgG0.2ml,效价 1:200-400。亲和纯化抗体,经聚合法标记过氧化物酶。
(4)DAB 显色试剂,含:
显色剂 A:DAB×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 C:×40倍 TBS 浓缩缓冲液,3ml。
使用说明 需要而未提供的试剂和器材:
1.转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜:通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原,将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2.稀释缓冲液:使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6):1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。
3.洗涤缓冲液:每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4.一抗:选择适合的一抗,用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5.摇床:膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃,需在摇床上操作。
6.相机:记录结果。
操作程序:
1.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3.封闭硝酸纤维膜:用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml,20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5.配制抗体稀释液:取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6.硝酸纤维膜孵育一抗:用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强,应提高一抗的浓度;如果有非特异性的条带,应提高一抗的稀释度。
7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8.硝酸纤维膜孵育二抗:用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗,效价 1:200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A,B,C 各1滴,混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色 1-30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11.观察,照相。
注意事项:
1.试剂频繁使用时置4℃,不常使用时置-20℃。显色剂 A 需置-20℃冷冻保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用。
2.显色工作液应新鲜配制。
相关搜索:Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(兔IgG)DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting
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